pembahasan kimia farmasi analitik

Aa Ringga 

  Hasil Dan Diskusi

a.      Optimasi kondisi pemisahan

Pemisahan vitamin ini pertama kali dioptimalkan menggunakan metode CZE (Zona kapiler elektroforesis). Hal ini bertujuan untuk mencampurkan reaksi yang berisi 8 vitamin (di 100 mgmL/1) dijelaskan dalam kimia bagian itu yang digunakan. sebagian besar CE penelitian berhubungan dengan memisahkan vitamin terutama dilakukan dengan menggunakan buffer borat pada konsentrasi yang berbeda (20e 50mM) dan pada nilai pH antara 8,0 dan 9,5 (Upaya menjamin bahwa analit dalam bentuk adanya ionik) (Blanco-Gomis et al, 1999;. Fotsing, Fillet, Bechet, Hubert, & Crommen, 1997; Schreiner et al., 2003; Su et al., 2001). Untuk tujuan tersebut, kandungan berbagai borat (berkisar 10-60 mM) pada pH 8,5 tersebut pertama kali mencoba. Hasil yang diperoleh ditunjukkan dalam Gambar. 2. Seperti bisa dilihat secara umum, analisis ditingkatkan bila kandungan borat meningkat, karena dapat menjelaskan dalam hal efek kekuatan ion, memberikan sebagai hasil EOF mengalami penurunan. Urutan perpindahan vitamin itu sama dengan yang ditemukan dalam literatur (Nishi, Tsumagari, & Kakimoto, 1989;. Su et al, 2001). Dengan demikian, vitamin B2, B3 (asam nikotinat), B5, B6 dan C semua itu bermuatan negatif pada pH 8,5, dan kecepatan perpindahan adanya tergantung pada derajat tingkatan ionisasi dan ukuran molekul. Dalam hal lain, vitamin B3 (nicotinamide) dan B12 tersebut tak-bermuatan dari analit pada pH ini, dan comigration pada puncak EOF itu terbukti.

Perlu diketahui bahwa tiamin (B1) adalah satu-satunya vitamin yang memiliki muatan positif pada pH ini, dan karena bermigrasi lebih cepat dari puncak EOF. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar. 2, penyelesaian antara C dan B5 vitamin puncak meningkat apabila meningkatkan kadar borat. Dengan demikian, sebagai kompromi di antara resolusi dan analisis waktu, borat 40mm penyangga dipilih untuk penelitian berikutnya.

Selanjutnya, efek dari pH di BGE diteliti. Nilai pH yang bervariasi antara 8,0 dan 9,5. Namun, tidak ada perbedaan yang signifikan ketika diamati pH berubah dalam rentang ini (data tidak ditampilkan). Dengan demikian, pH 8,5 terpilih untuk eksperimen berikut. Setelah diperoleh antara semua vitamin bermuatan, tujuan penelitian ini adalah untuk mendapatkan pemisahan dua vitamin yang bermuatan, B3 (nicotinamide) dan B12. MEKC telah digunakan untuk menyelesaikan pemisahan kedua analit netral dan ion. Adanya misel merupakan surfaktan di BGE bertindak sebagai "Fase pseudostationary", yang mengakibatkan kedua hidrofobik dan interaksi elektrostatik pada zat terlarut. Untuk tujuan ini, tiga surfaktan yang berlainan (SDS, SC dan SDC), pada konsentrasi berbeda kadar (25e75 kisaran mM), yang diuji. Sistem surfaktan dipilih karena jenis dan sifat dari misel dapat menggabungkan 2 fasa yang berbeda dan SDS misel (Fotsing et al, 1999;. Fujiwara, 1988;. Nishi et al, 1989), juga menunjukkan interaksi lemah dari zat terlarut dengan biliaris misel garam, mungkin dikaitkan dengan "terbalik karakter misel " surfaktan ini. Selain itu, ketika konsentrasi optimal semua surfaktan dibandingkan (lihat Gambar. 3), dapat diamati bahwa hanya SDS mampu menyelesaikan B5-C vitamin pasangan. Demikian, surfaktan ini dipilih untuk penelitian berikut.

Gambar. 1. Struktur dan konstanta pemisahan dari vitamin yang larut dalam air diselidiki.

b.      Penelitian Yang Berpotensi Mengganggu Senyawa

Karena dalam minuman berenergi dan minuman olahraga campuran kompleks yang terdapat bahan tambahan yang berbeda yang bisa menyerap di UV, sebuah penelitian diperkirakan dapat menemukan penganggu dalam sampel ini selanjutnya dilakukan pengujian berikutnya. Sebanyak empat gangguan yang mungkin (kafein, asam sorbat, asam benzoat dan asesulfam K) bersama-sama dengan IS (Asam amino benzoat, digunakan untuk melakukan penelitian kuantisasinya, lihat di bawah) secara bersamaan dipisahkan dengan delapan standar vitamin sebelumnya dianggap dengan menggunakan kondisi yang dipilih (lihat Gambar. 3A). Seperti dapat diamati, sebagian analit dapat diselesaikan. Namun, B3 yang (N.A.) – pasangan asam benzoate maksimum tidak dapat diselesaikan, yang dapat menghambat evaluasi keakuratan analit. Selain itu, asam sorbat dan IS saling tumpang tindih. Dengan demikian, untuk meningkatkan resolusi puncak, persentase MeOH yang berbeda (terdiri antara 2,5 dan 10% v / v) yang ditambahkan ke dalam BGE. Hasil yang diperoleh ditunjukkan pada Gambar. 4. Seperti dapat diamati, perpindahan peningkatan untuk semua senyawa dapat meningkatkan isi MeOH karena perubahan dalam potensi zeta, kekentalan dan dielektrik konstan, yang menyebabkan penurunan EOF. Penyesuaian terbaik antara resolusi dan analisis waktu didapatkan dengan menggunakan BGE yang mengandung MeOH 5% v/v (lihat Gambar. 3C). Dengan demikian, penggunan BGE ini, keadaan eksperimental lain, seperti suhu dan tegangan yang juga dipelajari.

Suhu bervariasi antara 15 dan 25˚C (data tidak ditampilkan). Ketika suhu menurun hingga 20˚C, maksimum B1 comigrated dengan maksimum vitamin C, sementara pada 15? C baik vitamin comigrated dengan vitamin B5; apalagi, waktu analisis meningkat sedangkan efisiensi maksimum menurun dengan demikian, suhu 25˚C dipilih untuk penelitian lebih lanjut.

Selanjutnya, tegangan yang bervariasi antara 20 dan 10 kV. Ketika tegangan berkurang hingga 15 kV (data tidak ditunjukkan), resolusi/puncak beberapa pasangan maksimum (kafein-B12 dan B2-B6) meningkat, sementara lain (Asam C-B5 dan IS-sorbat) pasang maksimum comigrated. Selain itu, analisis waktu meningkat dan efisiensi puncaknya sebagian besar menurun. Meskipun lebih jelas, diamati pada 10 kV. Demikian, tegangan 25 kV dipilih untuk penelitian selanjutnya.

Di sisi lain, waktu injeksi yang berikutnya bervariasi antara 2 dan 10 s. Kepekaan meningkat ketika waktu injeksi meningkat. Namun, lebih dari 8 s mengakibatkan tidak ada pemisahan C dan puncak B5. Akibatnya, waktu injeksi 8 s terpilih sebagai nilai optimal.

Gambar. 2. Pengaruh konten borat pada pemisahan standar vitamin menggunakan 10 mM (A), 20 mM (B), 40 mM (C) dan 50 mM (D) borat di BGE pada pH 8,5. kondisi CZE: injeksi hidrodinamik, 50 mbar? 8 s; tegangan pemisahan, 20 kV pada 25 C; deteksi,

214 nm. Puncak identifikasi: B3, nicotinamide; B3 (NA), asam nikotinat.

Gambar. 3. Pengaruh Jenis surfaktan terhadap pemisahan standar vitamin menggunakan

40 mM SDS (A), 50 mM SDC (B) dan 50 mM SC (C) pada BGE mengandung 40 mM

borat pada pH 8,5. kondisi eksperimental lainnya seperti pada Gambar. 2.

Gambar. 4. Pengaruh persentase MeOH pada pemisahan vitamin, potensi campur

senyawa dan IS menggunakan BGE yang berisi 40 mM borat pada pH 8,5, 40 mM

SDS dan 0% (A), 2,5% (B), 5% (C) dan 10% (D) MeOH (v / v). Puncak identifikasi: 1,kafein; 2, asam sorbat; 3, asam benzoat dan 4, asesulfam kondisi percobaan K. Lain

seperti pada Gambar. 2.

RSD: relatif standar deviasi; tm: waktu perpindahan; LOD: batas deteksi; LOQ: batas kuantifikasi.

^aDiperoleh dari kemiringan kurva kalibrasi dibangun dengan menggunakan rasio daerah puncak (area analit / IS area) vs konsentrasi analit (mg mL^-1).

Gambar. 5. Electropherograms dari madu bunga buah dengan vitamin ditambahkan (A), minuman olahraga (B) dan minuman energi yang (C) diperoleh dengan menggunakan BGE yang berisi 40 mM borat pada pH 8,5, 40 mM dari SDS dan 5% MeOH. Puncak identifikasi: 1, kafein; 2, asam sorbat dan 3, asam benzoat. kondisi eksperimental lainnya seperti pada Gambar. 2.

c.       Karakteristik kinerja dari metode MEKC (Metode  Kromatografi Kapiler Elektrokinetik Misel)

Dalam rangka secara signifikan menurunkan ketidakakuratan terkait dengan injeksi dan memastikan bahwa reproduktifitas yang lebih baik, penggunaan IS dalam analisis kuantitatif umumnya disukai (Altria, 2002). Presisi ditentukan dengan melakukan penelitian mengenai repeatabilities intra dan interday kali migrasi dan daerah maksimum (area analit / IS area) yang diperoleh dengan menyuntikkan 50 mg sama mL¹ 1 solusi untuk semua analit 6 kali per hari selama 3 hari (lihat Tabel 1).

Dalam semua kasus, standar relative deviasi (RSD) nilai lebih rendah dari 2,9 dan 4,6% untuk kali pemindahan dan daerah maksimum, masing-masing. Kurva kalibrasi eksternal dari Area maksimum dibangun penggunaan IS dengan cara menyuntikkan enam solusi standar dari tiap analit dalam rentang linear ditunjukkan pada Tabel 1. Garis lurus dengan r> 0,992 yang diperoleh. Tingkat terdeteksi (LOD) dan batasan kuantifikasi (LOQ) diperkirakan untuk signal-to-noise rasio 3 dan 10, masing-masing. Seperti yang diamati pada Tabel 1, LODs dan LOQs berkisar antara 0,10-1,20 mg mL 1 dan 0,33-3,96 mg mL^-1, masing-masing. Nilai-nilai ini dapat dibandingkan dengan yang sebelumnya diperoleh di literatur (Blanco-Gomis et al, 1999;. Delgado-Zamarre ~ tidak et al,. 2002; Schiewe et al., 1995; Schreiner et al., 2003; Su et al., 2001).

^arata-rata tiga rangkap; N.D .: tidak terdeteksi; e: tidak berlabel; N.Decl: Tidak diumumkan.

Puncak identifikasi dilakukan dengan membandingkan perpindahan saat dengan yang dari standar, dan bila perlu juga oleh pengaruhi sampel terhadap standar. Selain itu, standar kurva Selain kalibrasi diperoleh dengan menambah ekstrak setidaknya empat solusi dengan meningkatnya konsentrasi di bawah ke batas atas kisaran kerja masing (lihat Tabel 1). Itu kurva yang linear dengan r > 0,991, dan dalam semua kasus kemiringan kurva kalibrasi tidak berbeda secara signifikan dari yang diperoleh dengan metode kalibrasi eksternal. Dari hasil penelitian ini, dapat menyimpulkan bahwa tidak ada efek matriks diamati dalam penentuan analit Ini dalam minuman dianalisis. Dengan demikian, kalibrasi dari luar kurva dipekerjakan untuk analit kuantifikasi seluruh dianalisa sampel.

d.      Kuantifikasi Vitamin Dalam Energi Dan Olahraga Minuman Dan Buah Saripati

Di bawah kondisi optimal, semua sampel yang tersedia yang sasaran analisis MEKC. Ara. 5 menunjukkan herograms electrop diperoleh untuk madu bunga buah dengan vitamin ditambahkan (A), minuman olahraga (B) dan minuman energi (C). Ringkasan isi vitamin ditemukan untuk semua minuman dianalisis ditampilkan pada Tabel 2. Analisis minuman energi (ED) menunjukkan bahwa kandungan bahan-bahan tertentu dalam minuman ini adalah diversifikasi. Secara umum, ditemukan tingkat vitamin B yang setara (atau hampir sama) sebagai nilai-nilai pada label produk. Namun, sampel ED1 menunjukkan isi vitamin C lebih rendah dibandingkan diberi label. Nilai ini mungkin disebabkan oleh kerugian dalam penyimpanan dan suhu yang sangat bermasalah untuk vitamin C (oksidasi mudah).

Dalam semua diperiksa ED, menyatakan tingkat B12 vitamin (0.38e2.5 mg / 100 mL) berada di bawah LOQ, yang membuatnya tidak memungkinkan ketetapannya bersamaan dengan vitamin lainnya. Mengenai minuman olahraga (SD), rincian tentang Komposisi vitamin di label produk tidak diberi, dan hanya aktivasi  askorbat yang ditemukan sebagai komponen vitamin utama. Vitamin madu yang diperkaya (FN), kandungan dari vitamin B yang konsisten dengan nilai-nilai yang ditunjukkan dalam label minuman, sedangkan vitamin C ini di bawah dari yang dinyatakan dalam label.